Розробка удосконаленої методики вилучення й очистки IgЕ людини

Автори

Метою роботи було створення та оцінювання прийнятності удосконаленої методики вилучення IgЕ людини високого ступеня чистоти, придатного для застосування у високочутливих імуноаналітичних методах. Для досягнення поставленої мети було, по-перше, проведено узагальнення фізико-хімічних та біологічних властивостей імуноглобулінів різних класів і, по-друге, виконано аналіз основних методологічних прийомів, що застосовуються для вилучення й очистки IgЕ людини (іонообмінна хроматографія на ДЕАЕ- целюлозі, гель-фільтрація на сефадексі G-200 та сефакрилі S-300, різні варіанти імуноафінної хроматографії). Обґрунтування схеми вилучення й очистки IgЕ людини проведено з урахуванням як результатів власних досліджень, так і даних інших авторів. Удосконалена методика ґрунтується на використанні комбінації таких методологічних прийомів: послідовне вилучення із сироватки IgG людини (за допомогою афінної хроматографії на протеїні G), IgA й IgM людини (за допомогою імуноафінної хроматографії на основі сорбентів із анти-IgA та анти-IgM моноклональними антитілами), вилучення IgE людини двохетапною гель-фільтрацію на супердексі 200. Контроль якості отриманого імуноглобуліну проводили в імунодифузії за Оухтерлоні та електрофорезі в ПААГ у редукуючих умовах. Використання запропонованої схеми дає можливість одержувати IgE людини високого ступеня чистоти. Вихід IgE людини після всіх етапів очистки становив близько 42 % від початкової кількості імуноглобуліну Е в сироватці.

Рік видання: 
2013
Номер: 
3
УДК: 
УДК 577.27:57.083.33:543.54
С. 18—23. Іл. 4. Табл. 1. Бібліогр.: 22 назви.
Література: 

1. Імунологія: Підручник / А.Ю. Вершигора, Є.У. Пастер, Д.В. Колибо та ін.; передм. С. Комісаренка; за заг. ред. Є.У. Пастер. — К.: Вища школа, 2005. — 599 с.
2. K. Ishizaka et al., “Physico-chemical properties of human reaginic antibody. IV. Presence of a unique immunoglobulin as a carrier of reaginic activity”, J. Immunol., vol. 97, no. 1, pp. 75 — 85, 1966.
3. D.R. Stanworth et al., “Specific inhibition of the Prausnitz Kьstner reaction by an atypical human myeloma protein”, Lancet, vol. 290 (7511), pp. 330—332, 1967.
4. A.J. Bonnin et al., “Association of cigarette smoking with elevated serum IgE levels in Hispanic Puerto Rican men”, Ann. Allergy, vol. 67, pp. 609—611, 1991.
5. A. Miadonna and C. Zanussi, “IgE synthesis in aging. Enhancement of IgE production in subjects with autoantibodies”, Boll. 1st. Sieroter. Milan., vol. 58, pp. 75—80, 1979.
6. K.J. Erb, “Helminths, allergic disorders and IgE-mediated immune responses: where do we stand?”, Eur. J. Immunol., vol. 37, no. 5, pp. 1170—1173, 2007.
7. J. Duarte et al., “Total and functional parasite specific IgE responses in Plasmodium falciparum-infected patients exhibiting different clinical status”, Malar. J., vol. 6, pp. 1—13, 2007.
8. I.V. Nikolayenko et al., “Preparation of highly purified human IgG, IgM, and IgA for immunization and immunoanalysis”, Ukrainica Bioorganica Acta, vol. 2, no. 2, pp. 3—11, 2005.
9. Иммунологические методы / Пер. с нем., под ред. Г. Фримеля. — М.: Медицина, 1987. — 472 с.
10. E. Harlow and D. Lane, Antibodies. A laboratory manual. New York: Cold Spring Harbor, 1988, 726 p.
11. Иммунология: Практикум / Е.У. Пастер, В.В. Овод, В.К. Позур, Н.Е. Вихоть. — К.: Вища школа, 1989. — 304 с.
12. Шугалей И.В., Гарабаджиу А.В., Целинский И.В. Химия белка: Учебн. пособие. — СПб.: Проспект Науки, 2010. — 200 с.
13. R.G. Hamilton, The human IgG subclasses, C. Mohan, Ed. Baltimore: Johns Hopkins University School of Medicine, 2001, 64 p.
14. J. Hakimi et al., “The alpha subunit of the human IgE receptor (FcERI) is sufficient for high affinity IgE binding”, J. Biol. Chem., vol. 265, no. 36, pp. 22079— 22081, 1991.
15. J. Kleine-Tebbe et al., “Purification of immunoglobulin E (IgE) antibodies from sera with high IgE titers”, J. Immunol. Methods, vol. 179, no. 2, pp. 153—164, 1995.
16. U.R. Laemmli, “Cleavage of structural proteins during the assembly of the of bacteriophage T4”, Nature, vol. 227, pp. 680 685, 1970.
17. Галкін О.Ю. Одержання імуноафінного сорбенту та розробка методики специфічного виділення IgM людини // Наукові вісті НТУУ “КПІ”. — 2009. — № 2. — С. 98—102.
18. L. Kеgedal et al., “Chemical, physical and chromatographic properties of Superdex 75 prep grade and Superdex 200 prep grade gel filtration media”, J. Chromatogr., vol. 537, pp. 17—32, 1991.
19. Галкін О.Ю., Дуган О.М. Порівняння схем імунізації мишей лінії Balb/c для одержання моноклональних антитіл до IgА людини // Науковий вісник Нац. унту біоресурсів та природокористування України. — 2009. — Вип. 134, ч. 1. — С. 88—97.
20. V.S. Chowdary et al., “A study on serum IgE and eosinophils in respiratory allergy patients”, Indian J. Allergy Asthma Immunol., vol. 17, no. 1, pp. 21—24, 2003.
21. T.A.E. Platts-Mills, “The role of immunoglobin E in allergy and asthma”, Am. J. Respir. Crit. Care. Med., vol. 164, pp. S1—S5, 2001.
22. N. Novak and T. Bieber, “Allergic and non-allergic forms of atopic disease”, J. Allergy. Clin. Immunol., vol. 112, pp. 252—262, 2003.

Список літератури у транслітерації: 

1. Imunolohii͡a: Pidruchnyk / A.I͡u. Vershyhora, I͡e.U. Paster, D.V. Kolybo ta in.; peredm. S. Komisarenka; za zah. red. I͡e.U. Paster. – K.: Vyshcha shkola, 2005. – 599 s.
2. K. Ishizaka et al., “Physico-chemical properties of human reaginic antibody. IV. Presence of a unique immunoglobulin as a carrier of reaginic activity”, J. Immunol., vol. 97, no. 1, pp. 75 – 85, 1966.
3. D.R. Stanworth et al., “Specific inhibition of the Prausnitz-Küstner reaction by an atypical human myeloma protein”, Lancet, vol. 290 (7511), pp. 330–332, 1967.
4. A.J. Bonnin et al., “Association of cigarette smoking with elevated serum IgE levels in Hispanic Puerto Rican men”, Ann. Allergy, vol. 67, pp. 609–611, 1991.
5. A. Miadonna and C. Zanussi, “IgE synthesis in aging. Enhancement of IgE production in subjects with autoantibodies”, Boll. 1st. Sieroter. Milan., vol. 58, pp. 75–80, 1979.
6. K.J. Erb, “Helminths, allergic disorders and IgE-mediated immune responses: where do we stand?”, Eur. J. Immunol., vol. 37, no. 5, pp. 1170–1173, 2007.
7. J. Duarte et al., “Total and functional parasite specific IgE responses in Plasmodium falciparum-infected patients exhibiting different clinical status”, Malar. J., vol. 6, pp. 1–13, 2007.
8. I.V. Nikolayenko et al., “Preparation of highly purified human IgG, IgM, and IgA for immunization and immunoanalysis”, Ukrainica Bioorganica Acta, vol. 2, no. 2, pp. 3–11, 2005.
9. Immunologicheskie metody / Per. s nem., pod red. G.Frimeli͡a. – M.: Medit͡sina, 1987. – 472 s.
10. E. Harlow and D. Lane, Antibodies. A laboratory manual. New York: Cold Spring Harbor, 1988, 726 p.
11. Immunologii͡a: Praktikum / E.U. Paster, V.V. Ovod, V.K. Pozur, N.E. Vikhot'. – K.: Vyssh. shkola, 1989. – 304 s.
12. Shugaleĭ I.V., Garabadzhiu A.V., T͡Selinskiĭ I.V. Khimii͡a belka: Uchebn. posobie. – SPb.: Prospekt Nauki, 2010. – 200 s.
13. R.G. Hamilton, The human IgG subclasses, C. Mohan, Ed. Baltimore: Johns Hopkins University School of Medicine, 2001, 64 p.
14. J. Hakimi et al., “The alpha subunit of the human IgE receptor (FcERI) is sufficient for high affinity IgE binding”, J. Biol. Chem., vol. 265, no. 36, pp. 22079–22081, 1991.
15. J. Kleine-Tebbe et al., “Purification of immunoglobulin E (IgE) antibodies from sera with high IgE titers”, J. Immunol. Methods, vol. 179, no. 2, pp. 153–164, 1995.
16. U.R. Laemmli, “Cleavage of structural proteins during the assembly of the of bacteriophage T4”, Nature, vol. 227, pp. 680–685, 1970.
17. Halkin O.I͡u. Oderz͡hanni͡a imunoafinnoho sorbentu ta rozrobka metodyky spet͡syfichnoho vydilenni͡a IgM li͡udyny // Naukovi visti NTUU “KPI”. – 2009. – # 2. – S. 98–102.
18. L. Kågedal et al., “Chemical, physical and chromatographic properties of Superdex 75 prep grade and Superdex 200 prep grade gel filtration media”, J. Chromatogr., vol. 537, pp. 17–32, 1991.
19. Halkin O.I͡u., Duhan O.M. Porivni͡anni͡a skhem imunizat͡siï mysheĭ liniï Balb/c dli͡a oderz͡hanni͡a monoklonal′nykh antytil do IgA li͡udyny // Naukovyĭ visnyk Nat͡s. un-tu bioresursiv ta pryrodokorystuvanni͡a Ukraïny. – 2009. – Vyp. 134, ch. 1. – S. 88–97.
20. V.S. Chowdary et al., “A study on serum IgE and eosinophils in respiratory allergy patients”, Indian J. Allergy Asthma Immunol., vol. 17, no. 1, pp. 21–24, 2003.
21. T.A.E. Platts-Mills, “The role of immunoglobin E in allergy and asthma”, Am. J. Respir. Crit. Care. Med., vol. 164, pp. S1–S5, 2001.
22. N. Novak and T. Bieber, “Allergic and non-allergic forms of atopic disease”, J. Allergy. Clin. Immunol., vol. 112, pp. 252–262, 2003.

Текст статтіРозмір
2013-3-3.pdf254.69 КБ

Тематичні розділи журналу

,