Разработка усовершенствованной методики получения Fc-фрагментов IgM человека

Автори

Разработана усовершенствованная методика получения и выделения Fc-фрагментов IgM человека. Для достижения поставленной цели проводили оптимизацию условий гидролиза иммуноглобулинов с последующими выделением и очисткой (Fс)5μ-фрагментов. Разработаная усовершенствованная методика получения Fc-фрагментов IgM человека предусматривает: папаиновый гидролиз иммуноглобулинов в среде азота в течение 30 мин, что позволяет достичь максимального выхода Fсμ-фрагментов без их дальнейшей деградации, выделение и очистку Fсμ-фрагментов путем двухэтапной гельфильтрации на сефакриле S-300, контроль чистоты целевого продукта в электрофорезе в ПААГ с ДСН и иммунодиффузии по Оухтерлони. Использование предложенной схемы позволяет получать Fсμ-фрагменты высокой степени чистоты. Выход Fсμ-фрагментов после всех этапов очистки составил около 15 % от исходного количества иммуноглобулинов в препарате. Молекулярная масса полученных Fcμ-фрагментов составила около 95 кДа.

Год издания: 
2012
Номер: 
3
УДК: 
577.27:57.083.33:543.54
С. 7—11. Іл. 6. Бібліогр.: 17 назв.
Литература: 

1. Ройт А., Бростофф Дж., Мейл Д. Иммунология. — М.: Мир, 2002. — 592 с.
2. W. Bains, Biotechnology from A to Z. Oxford, GB: IRL Press, 1998, 422 pр.
3. Імунологія: Підручник / А.Ю. Вершигора, Є.У. Пастер, Д.В. Колибо та ін.; передм. С. Комісаренка; за заг. ред. Є.У. Пастер. — К.: Вища шк., 2005. — 598 с.
4. Якобисяк М. Імунологія / Пер. з польської за ред. проф. В.В. Чоп’як. — Вінниця: Нова книга, 2004. — 672 с.
5. Иммунология: Практикум / Е.У. Пастер, В.В. Овод, В.К. Позур, Н.Е. Вихоть. — К.: Вища шк., 1989. — 304 с.
6. Антитела. Методы: Кн. 1 / Пер. c англ.; под ред. Д. Кэтти. — М.: Мир, 1991. — 287 с.
7. S.-E. Svehag et al., “Ultrastructure of papain and pepsin digestion fragments of human IgM globulins”, J. Exp. Med., vol. 130, pp. 691—705, 1969.
8. G.M. Butchko and F.P. Inman, “Mercaptan-induced fragmentation of a subunit-like proteolytic fragment of lnmunoglobulin M”, Biochem. J. (Great Britain), vol. 127, pp. 801—807, 1972.
9. K. Onoue et al., “Structure of human immunoglobulin M. II. Isolation of a high molecular weight Fc fragment of IgM composed of several Fc subunits”, J. Immunol., vol. 100, pp. 238—244, 1968.
10. I.D. Wilson, “Studies on the products of peptic digestion of IgA”, Immunol., vol. 20, pp. 327—339, 1971.
11. I.V. Nikolayenko et al., “Preparation of highly purified human IgG, IgM, and IgA for immunization and immunoanalysis”, Ukrainica Bioorganica Acta, vol. 2, no. 2, pp. 3—11, 2005.
12. Hsiao Shu-his and F.W. Putman, “The cleavage of human g-globulin by papain”, J. Biol. Chem., vol. 236, no 1, pp. 122—135, 1961.
13. J. Goding, Monoсlonal antibodies. Principles and practice. San Diego: Acedemic press, 1996, 492 рp.
14. U.R. Laemmli, “Cleavage of structural proteins during the assembly of the of bacteriophage T4”, Nature, vol. 227, pp. 680—685, 1970.
15. Михайлов А.Т., Симирский В.Н. Методы иммунохимического анализа в биологии развития (практическое руководство). — М.: Наука, 1991. — 288 с.
16. E. Harlow and D. Lane, Antibodies. A laboratory manual. New York: Cold Spring Harbor, 1988, 726 pp.
17. Иммунологические методы / Под ред. Х. Фримеля. — М.: Мир, 1979. — 520 с.

Полнотекстовый документSize
2012-3-1.pdf366.25 KB

Тематичні розділи журналу

,