Разработка усовершенствованной методики выделения и очистки IgЕ человека

Автори

Целью работы было создание и оценка приемлемости усовершествованной методики выделения IgЕ человека высокой степени чистоты, пригодного для применения в высокочувствительных иммуноаналитических методах. Для достижения поставленной цели, во-первых, было проведено обобщение физико-химических и биологических свойств иммуноглобулинов различных классов, и, во-вторых, был сделан анализ основных методологических приемов, применяемых для выделения и очистки IgЕ человека (ионообменная хроматография на ДЭАЭ-целлюлозе, гель-фильтрация на сефадексе G-200 и сефакриле S-300, различные варианты иммуноаффинной хроматографии). Обоснование схемы выделения и очистки IgЕ человека проведено с учетом как результатов собственных исследований, так и данных других авторов. Усовершенствованная методика основывается на использовании комбинации следующих методологических приемов: последовательное удаление из сыворотки IgG человека (с помощью аффинной хроматографии на протеине G), IgA и IgM человека (с помо щью иммуноаффинной хроматографии на основе сорбентов с анти-IgA и анти-IgM моноклональными антителами), выделение IgE человека путем двухэтапной гель-фильтрации на супердексе 200. Контроль качества полученного иммуноглобулина проводили в иммунодиффузии по Оухтерлони и электрофорезе в ПААГ в редуцирующих условиях. Использование предлагаемой схемы позволя-ет получать IgE человека высокой степени чистоты. Выход IgE человека после всех этапов очистки составил около 42 % от исходного количества иммуноглобулина Е в сыворотке крови. Ключевые слова: IgЕ человека, моноклональные антитела, гель-фильтрация, аффинная и иммуноаффинная хроматография.

Год издания: 
2013
Номер: 
3
УДК: 
УДК 577.27:57.083.33:543.54
С. 18—23. Іл. 4. Табл. 1. Бібліогр.: 22 назви.
Литература: 

1. Імунологія: Підручник / А.Ю. Вершигора, Є.У. Пастер, Д.В. Колибо та ін.; передм. С. Комісаренка; за заг. ред. Є.У. Пастер. — К.: Вища школа, 2005. — 599 с.
2. K. Ishizaka et al., “Physico-chemical properties of human reaginic antibody. IV. Presence of a unique immunoglobulin as a carrier of reaginic activity”, J. Immunol., vol. 97, no. 1, pp. 75 — 85, 1966.
3. D.R. Stanworth et al., “Specific inhibition of the Prausnitz Kьstner reaction by an atypical human myeloma protein”, Lancet, vol. 290 (7511), pp. 330—332, 1967.
4. A.J. Bonnin et al., “Association of cigarette smoking with elevated serum IgE levels in Hispanic Puerto Rican men”, Ann. Allergy, vol. 67, pp. 609—611, 1991.
5. A. Miadonna and C. Zanussi, “IgE synthesis in aging. Enhancement of IgE production in subjects with autoantibodies”, Boll. 1st. Sieroter. Milan., vol. 58, pp. 75—80, 1979.
6. K.J. Erb, “Helminths, allergic disorders and IgE-mediated immune responses: where do we stand?”, Eur. J. Immunol., vol. 37, no. 5, pp. 1170—1173, 2007.
7. J. Duarte et al., “Total and functional parasite specific IgE responses in Plasmodium falciparum-infected patients exhibiting different clinical status”, Malar. J., vol. 6, pp. 1—13, 2007.
8. I.V. Nikolayenko et al., “Preparation of highly purified human IgG, IgM, and IgA for immunization and immunoanalysis”, Ukrainica Bioorganica Acta, vol. 2, no. 2, pp. 3—11, 2005.
9. Иммунологические методы / Пер. с нем., под ред. Г. Фримеля. — М.: Медицина, 1987. — 472 с.
10. E. Harlow and D. Lane, Antibodies. A laboratory manual. New York: Cold Spring Harbor, 1988, 726 p.
11. Иммунология: Практикум / Е.У. Пастер, В.В. Овод, В.К. Позур, Н.Е. Вихоть. — К.: Вища школа, 1989. — 304 с.
12. Шугалей И.В., Гарабаджиу А.В., Целинский И.В. Химия белка: Учебн. пособие. — СПб.: Проспект Науки, 2010. — 200 с.
13. R.G. Hamilton, The human IgG subclasses, C. Mohan, Ed. Baltimore: Johns Hopkins University School of Medicine, 2001, 64 p.
14. J. Hakimi et al., “The alpha subunit of the human IgE receptor (FcERI) is sufficient for high affinity IgE binding”, J. Biol. Chem., vol. 265, no. 36, pp. 22079— 22081, 1991.
15. J. Kleine-Tebbe et al., “Purification of immunoglobulin E (IgE) antibodies from sera with high IgE titers”, J. Immunol. Methods, vol. 179, no. 2, pp. 153—164, 1995.
16. U.R. Laemmli, “Cleavage of structural proteins during the assembly of the of bacteriophage T4”, Nature, vol. 227, pp. 680 685, 1970.
17. Галкін О.Ю. Одержання імуноафінного сорбенту та розробка методики специфічного виділення IgM людини // Наукові вісті НТУУ “КПІ”. — 2009. — № 2. — С. 98—102.
18. L. Kеgedal et al., “Chemical, physical and chromatographic properties of Superdex 75 prep grade and Superdex 200 prep grade gel filtration media”, J. Chromatogr., vol. 537, pp. 17—32, 1991.
19. Галкін О.Ю., Дуган О.М. Порівняння схем імунізації мишей лінії Balb/c для одержання моноклональних антитіл до IgА людини // Науковий вісник Нац. унту біоресурсів та природокористування України. — 2009. — Вип. 134, ч. 1. — С. 88—97.
20. V.S. Chowdary et al., “A study on serum IgE and eosinophils in respiratory allergy patients”, Indian J. Allergy Asthma Immunol., vol. 17, no. 1, pp. 21—24, 2003.
21. T.A.E. Platts-Mills, “The role of immunoglobin E in allergy and asthma”, Am. J. Respir. Crit. Care. Med., vol. 164, pp. S1—S5, 2001.
22. N. Novak and T. Bieber, “Allergic and non-allergic forms of atopic disease”, J. Allergy. Clin. Immunol., vol. 112, pp. 252—262, 2003.

Транслитерированый список литературы: 

1. Imunolohii͡a: Pidruchnyk / A.I͡u. Vershyhora, I͡e.U. Paster, D.V. Kolybo ta in.; peredm. S. Komisarenka; za zah. red. I͡e.U. Paster. – K.: Vyshcha shkola, 2005. – 599 s.
2. K. Ishizaka et al., “Physico-chemical properties of human reaginic antibody. IV. Presence of a unique immunoglobulin as a carrier of reaginic activity”, J. Immunol., vol. 97, no. 1, pp. 75 – 85, 1966.
3. D.R. Stanworth et al., “Specific inhibition of the Prausnitz-Küstner reaction by an atypical human myeloma protein”, Lancet, vol. 290 (7511), pp. 330–332, 1967.
4. A.J. Bonnin et al., “Association of cigarette smoking with elevated serum IgE levels in Hispanic Puerto Rican men”, Ann. Allergy, vol. 67, pp. 609–611, 1991.
5. A. Miadonna and C. Zanussi, “IgE synthesis in aging. Enhancement of IgE production in subjects with autoantibodies”, Boll. 1st. Sieroter. Milan., vol. 58, pp. 75–80, 1979.
6. K.J. Erb, “Helminths, allergic disorders and IgE-mediated immune responses: where do we stand?”, Eur. J. Immunol., vol. 37, no. 5, pp. 1170–1173, 2007.
7. J. Duarte et al., “Total and functional parasite specific IgE responses in Plasmodium falciparum-infected patients exhibiting different clinical status”, Malar. J., vol. 6, pp. 1–13, 2007.
8. I.V. Nikolayenko et al., “Preparation of highly purified human IgG, IgM, and IgA for immunization and immunoanalysis”, Ukrainica Bioorganica Acta, vol. 2, no. 2, pp. 3–11, 2005.
9. Immunologicheskie metody / Per. s nem., pod red. G.Frimeli͡a. – M.: Medit͡sina, 1987. – 472 s.
10. E. Harlow and D. Lane, Antibodies. A laboratory manual. New York: Cold Spring Harbor, 1988, 726 p.
11. Immunologii͡a: Praktikum / E.U. Paster, V.V. Ovod, V.K. Pozur, N.E. Vikhot'. – K.: Vyssh. shkola, 1989. – 304 s.
12. Shugaleĭ I.V., Garabadzhiu A.V., T͡Selinskiĭ I.V. Khimii͡a belka: Uchebn. posobie. – SPb.: Prospekt Nauki, 2010. – 200 s.
13. R.G. Hamilton, The human IgG subclasses, C. Mohan, Ed. Baltimore: Johns Hopkins University School of Medicine, 2001, 64 p.
14. J. Hakimi et al., “The alpha subunit of the human IgE receptor (FcERI) is sufficient for high affinity IgE binding”, J. Biol. Chem., vol. 265, no. 36, pp. 22079–22081, 1991.
15. J. Kleine-Tebbe et al., “Purification of immunoglobulin E (IgE) antibodies from sera with high IgE titers”, J. Immunol. Methods, vol. 179, no. 2, pp. 153–164, 1995.
16. U.R. Laemmli, “Cleavage of structural proteins during the assembly of the of bacteriophage T4”, Nature, vol. 227, pp. 680–685, 1970.
17. Halkin O.I͡u. Oderz͡hanni͡a imunoafinnoho sorbentu ta rozrobka metodyky spet͡syfichnoho vydilenni͡a IgM li͡udyny // Naukovi visti NTUU “KPI”. – 2009. – # 2. – S. 98–102.
18. L. Kågedal et al., “Chemical, physical and chromatographic properties of Superdex 75 prep grade and Superdex 200 prep grade gel filtration media”, J. Chromatogr., vol. 537, pp. 17–32, 1991.
19. Halkin O.I͡u., Duhan O.M. Porivni͡anni͡a skhem imunizat͡siï mysheĭ liniï Balb/c dli͡a oderz͡hanni͡a monoklonal′nykh antytil do IgA li͡udyny // Naukovyĭ visnyk Nat͡s. un-tu bioresursiv ta pryrodokorystuvanni͡a Ukraïny. – 2009. – Vyp. 134, ch. 1. – S. 88–97.
20. V.S. Chowdary et al., “A study on serum IgE and eosinophils in respiratory allergy patients”, Indian J. Allergy Asthma Immunol., vol. 17, no. 1, pp. 21–24, 2003.
21. T.A.E. Platts-Mills, “The role of immunoglobin E in allergy and asthma”, Am. J. Respir. Crit. Care. Med., vol. 164, pp. S1–S5, 2001.
22. N. Novak and T. Bieber, “Allergic and non-allergic forms of atopic disease”, J. Allergy. Clin. Immunol., vol. 112, pp. 252–262, 2003.

Полнотекстовый документSize
2013-3-3.pdf254.69 KB

Тематичні розділи журналу

,